Análise de suportes de amostragem por Dried Blood Spots (DBS) aplicada ao controle de dopagem genética no esporte

Leite, João Victor Meirelles

Please use this identifier to cite or link to this item: http://hdl.handle.net/11422/17237

Type:	Trabalho de conclusão de graduação
Title:	Análise de suportes de amostragem por Dried Blood Spots (DBS) aplicada ao controle de dopagem genética no esporte
Author(s)/Inventor(s):	Leite, João Victor Meirelles
Advisor:	Barboza, Luciana Pizzatti
Co-advisor:	Gutiérrez López, Sheila Barbara
Abstract:	O rápido desenvolvimento das técnicas de terapia gênica é uma perspectiva promissora para a área da saúde, entretanto, igualmente implica em um risco potencial ao possibilitar novas abordagens não-terapêuticas, como, por exemplo, o melhoramento do desempenho atlético no esporte. Sabe-se que os avanços recentes comprovados em relação a biossegurança e aos benefícios da transferência gênica em humanos, aumentaram a probabilidade de busca do doping genético por atletas e que, além disso, um dos genes exógenos mais prováveis a serem utilizados como alvo é a eritropoietina (EPO. Tendo em vista a inclusão do doping genético no Código Mundial Antidopagem, é de fundamental importância o desenvolvimento de métodos com especificidade e sensibilidade adequadas para sua detecção. Abordagens baseadas no uso de técnicas de Reação em Cadeia da Polimerase (PCR) são uma alternativa em amostras de sangue, principalmente quando aliados à amostragens não-convencionais, como, por exemplo, a coleta por Dried Blood Spots (DBS). Este é um sistema menos invasivo e de maior robustez, possibilitando um armazenamento e transporte mais estável. Neste trabalho foram analisados 3 diferentes suportes para DBS, visando acoplar os mesmos em um método e detecção para o cenário de controle de dopagem. Duas condições diferentes de temperatura de armazenamento (temperatura ambiente e -30 ºC) e dois períodos de estocagem (1 e 21 dias) foram testados com o objetivo de averiguar o comportamento dos suportes. Amostras de sangue foram coletadas de 6 voluntários saudáveis, fortificadas com material de referência de EPO e tiveram seu DNA extraído. O rendimento foi avaliado por fluorimetria e a pureza dos produtos obtidos por espectrofotometria na região do ultravioleta. Dois ensaios para PCR tendo como alvo diferentes junções éxon/éxon de EPO transgênica foram usados para amplificação, assim como um ensaio para um gene constitutivo. Todas as amostras extraídas apresentaram rendimento, pureza e integridade adequados para um cenário de controle de dopagem. Os melhores rendimentos á - 30 ºC foram obtidos com o papel NUCLEIC-CARD™, enquanto à temperatura ambiente com o suporte Whatman. Para o tempo de 1 dia, não há correlação entre o uso de refrigeração e incrementos positivos nos resultados de extração e/ou detecção. Para o tempo de 21 dias, o mesmo é observado para o Whatman, enquanto os outros dois suportes expressam melhorias no montante de DNA extraído. Estudos futuros para avaliar a implementação de novas abordagens de aplicações não-volumétricas sob os suportes e de novos métodos de confirmação mais sensíveis são necessários. Novas perspectivas de abordagens por PCR multiplex são encorajadas e podem ser aplicados para detecção de múltiplos alvos em amostras de DBS.
Keywords:	Dried Blood Spots (DBS) Dopagem genética Eritropoietina Reação em Cadeia da Polimerase (PCR)
Subject CNPq:	CNPQ::CIENCIAS EXATAS E DA TERRA::QUIMICA::QUIMICA ORGANICA
Production unit:	Instituto de Química
Publisher:	Universidade Federal do Rio de Janeiro
Issue Date:	2022
Publisher country:	Brasil
Language:	por
Right access:	Acesso Aberto
Appears in Collections:	Química

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