Reconhecimento e clivagem de proteínas de matriz extracelular por Candida haemulonii

Magalhães, Lucas Barros

Please use this identifier to cite or link to this item: http://hdl.handle.net/11422/17729

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DC Field	Value	Language
dc.contributor.advisor	Santos, André Luis Souza dos	-
dc.contributor.author	Magalhães, Lucas Barros	-
dc.date.accessioned	2022-07-19T16:03:55Z	-
dc.date.available	2023-12-21T03:00:17Z	-
dc.date.issued	2021-06-02	-
dc.identifier.citation	MAGALHÃES, L. B. (2021). Reconhecimento e clivagem de proteínas de matriz extracelular por Candida haemulonii [Trabalho de Conclusão de Curso, Universidade Federal do Rio de Janeiro]. Repositório Institucional Pantheon.	pt_BR
dc.identifier.uri	http://hdl.handle.net/11422/17729	-
dc.language	por	pt_BR
dc.publisher	Universidade Federal do Rio de Janeiro	pt_BR
dc.rights	Acesso Aberto	pt_BR
dc.subject	Candida	pt_BR
dc.subject	Biofilmes	pt_BR
dc.subject	Proteínas da matriz extracelular	pt_BR
dc.subject	Biofilms	pt_BR
dc.subject	Extracellular matrix proteins	pt_BR
dc.title	Reconhecimento e clivagem de proteínas de matriz extracelular por Candida haemulonii	pt_BR
dc.type	Trabalho de conclusão de graduação	pt_BR
dc.contributor.authorLattes	http://lattes.cnpq.br/6791883509222312	pt_BR
dc.contributor.advisorCo1	Silva, Laura Nunes	-
dc.contributor.referee1	Nimrichter, Leonardo	-
dc.contributor.referee2	Lopes, Livia Cristina Liporagi	-
dc.contributor.referee3	Mello, Thaís Pereira de	-
dc.contributor.referee4	Nico, Dirlei	-
dc.description.resumo	O complexo Candida haemulonii compreende 3 espécies, sendo elas: Candida haemulonii, Candida duobushaemulonii e Candida haemulonii var. vulnera. Essas espécies emergiram como notórias leveduras associadas a infecções invasivas com altas taxas de falhas na terapêutica clínica. O processo de adesão às proteínas de matriz extracelular (PMEs) constitui uma etapa importante na colonização microbiana aos tecidos do hospedeiro. Essa adesão é mediada por diversas moléculas conhecidas genericamente como adesinas. Os mecanismos de adesão também são importantes para a formação de biofilme, visto que boa parte das infecções humanas está associada a essa forma de organização celular. As PMEs têm como principal função formar uma rede estrutural de suporte para as células do tecido do hospedeiro. O objetivo do presente estudo foi examinar a capacidade de reconhecimento de PMEs (laminina e fibronectina) pela espécie C. haemulonii bem como avaliar a influência dessas macromoléculas no processo de adesão e formação de biofilme, além de avaliar o papel de proteases secretadas na degradação dessas proteínas. Os resultados demonstraram que ambas as proteínas foram capazes de se ligar à superfície de diferentes isolados clínicos pertencentes à espécie C. haemulonii, como evidenciado através de citometria de fluxo. O porcentual de células fúngicas capazes de se ligar à fibronectina e laminina foi de, respectivamente, 36,5 ± 4,5 e 42,4 ± 3,6 para o isolado Ch3 (C.haemulonii) 34,8 ± 4,5 e 57,4 ± 5,7 para o isolado Ch4 (C.haemulonii); e 29,9 ± 4,5 e 48,8 ± 5,6 para o isolado Ch7 (C.haemulonii). As imagens de microscopia confocal corroboraram os dados de citometria, demonstrando a ligação das proteínas na superfície celular dos isolados fúngicos. A adesão (4 h) e a formação de biofilme (48 h) foram avaliadas na presença de fibronectina e laminina imobilizadas em uma superfície de poliestireno. A adesão inicial foi avaliada por contagem em microscópio invertido e a formação de biofilme evidenciada pelas colorações de cristal violeta e safranina (revelando biomassa e matriz polimérica extracelular, respectivamente). No resultado da adesão foi observado um aumento significativo no número de células aderidas em ambas às proteínas testadas, a saber: 48,1 ± 6,0 e 48,8 ± 5,4 fungos/campo microscópico para o isolado Ch4, respectivamente, para poliestireno recoberto com fibronectina e laminina em relação aos controles de poliestireno não revestido (28,7 ± 5,3) e poliestireno recoberto com albumina (28,4 ± 7,5). Já na formação do biofilme, não se observou nenhuma alteração significativa levando-se em consideração os dois parâmetros analisados (biomassa e matriz polimérica extracelular). A capacidade de degradação dos substratos protéicos por proteases secretadas durante a formação de biofilme foi avaliada por Western Blotting, utilizando-se anticorpos anti-fibronectina e anti-laminina. Como resultado do experimento de clivagem, foi possível observar uma degradação das duas proteínas testadas por proteases presentes no sobrenadante recuperado do biofilme fúngico. Essa degradação, por sua vez, foi analisada durante os períodos de 24, 48, 72 e 96 horas, sendo o último tempo o ápice dessa degradação. Por fim, foi avaliada a classe enzimática responsável pela degradação de PMEs por Western Blotting utilizando-se inibidores específicos para essas diferentes classes enzimáticas. Como resultado desse experimento, foi possível observar uma inibição parcial da degradação de fibronectina, principalmente pelo inibidor PMSF (Phenylmethylsulfonyl fluoride), um inibidor clássico de serina proteases. Essas interações avaliadas, portanto, podem desempenhar um papel relevante na patogênese de fungos pertencentes ao complexo C. haemulonii.	pt_BR
dc.publisher.country	Brasil	pt_BR
dc.publisher.department	Instituto de Microbiologia Paulo de Góes	pt_BR
dc.publisher.initials	UFRJ	pt_BR
dc.subject.cnpq	CNPQ::CIENCIAS BIOLOGICAS::MICROBIOLOGIA	pt_BR
dc.subject.cnpq	CNPQ::CIENCIAS BIOLOGICAS::IMUNOLOGIA	pt_BR
dc.embargo.terms	aberto	pt_BR
Appears in Collections:	Ciências Biológicas - Microbiologia e Imunologia

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