Papel funcional da tip47 na replicação do vírus dengue 2 em hepatócitos humanos

Ferreira, Fabiana Abdalla Pires

Please use this identifier to cite or link to this item: http://hdl.handle.net/11422/19260

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DC Field	Value	Language
dc.contributor.advisor	Da Poian, Andrea Thompson	-
dc.contributor.author	Ferreira, Fabiana Abdalla Pires	-
dc.date.accessioned	2022-11-30T15:52:00Z	-
dc.date.available	2023-12-21T03:09:38Z	-
dc.date.issued	2018-12-19	-
dc.identifier.citation	FERREIRA, F. A. P. (2018). Papel funcional da TIP47 na replicação do vírus dengue 2 em hepatócitos humanos [Trabalho de Conclusão de Curso, Universidade Federal do Rio de Janeiro]. Repositório Institucional Pantheon.	pt_BR
dc.identifier.uri	http://hdl.handle.net/11422/19260	-
dc.language	por	pt_BR
dc.publisher	Universidade Federal do Rio de Janeiro	pt_BR
dc.rights	Acesso Aberto	pt_BR
dc.subject	Vírus da Dengue	pt_BR
dc.subject	Proteína C	pt_BR
dc.subject	Gotículas lipídicas	pt_BR
dc.subject	Perilipina-5	pt_BR
dc.subject	Perilipina-3	pt_BR
dc.subject	Dengue virus	pt_BR
dc.subject	Protein C	pt_BR
dc.subject	Lipid droplets	pt_BR
dc.subject	Perilipin-5	pt_BR
dc.subject	Perilipin-3	pt_BR
dc.title	Papel funcional da tip47 na replicação do vírus dengue 2 em hepatócitos humanos	pt_BR
dc.type	Trabalho de conclusão de graduação	pt_BR
dc.contributor.authorLattes	http://lattes.cnpq.br/8445975478934322	pt_BR
dc.contributor.advisorCo1	Zeidler, Julianna Dias	-
dc.contributor.referee1	Miranda, Iranaia Assunção	-
dc.contributor.referee2	Mousovich Neto, Felippe	-
dc.contributor.referee3	Oliveira, Fernanda Almeida de	-
dc.contributor.referee4	Costa, Luciana Jesus da	-
dc.description.resumo	O vírus da dengue (DENV) é o causador da principal arbovirose humana que atinge inúmeras pessoas anualmente, sendo um grande problema de saúde pública no mundo. A infecção pelo DENV provoca diversas alterações no metabolismo de lipídios, sendo o acometimento hepático um dos principais sintomas associados ao desenvolvimento de casos graves da doença. Estudos anteriores revelaram que a interação entre a proteína capsídica do DENV (DENVC) e gotículas lipídicas (GL) é essencial para a replicação viral. Além disso, experimentos de microscopia de força atômica demonstraram que a Tip47 ou perilipina 3 interage com DENVC in vitro. No entanto, ainda não se sabe se Tip47 é de fato um componente essencial para a replicação do DENV nas células hospedeiras. Com o objetivo de explorar nesse sentido, silenciamos o gene da Tip47 por meio do sistema CRISPR/Cas9 em células de hepatocarcinoma humano Huh7, gerando uma sublinhagem policlonal Huh7- ΔTip47, que tem redução de cerca de 80% na expressão de Tip47, uma sublinhagem clonal cuja expressão de Tip47 é nula (Huh7-ΔTip47-E7), bem como uma sublinhagem controle Huh7-ΔScrb. Por meio de cromatografia de camada delgada (TLC), vimos que as sublinhagens Huh7-ΔTip47 e Huh7-ΔScrb não apresentam diferenças quanto ao conteúdo lipídico intracelular (triacilglicerol, ésteres de colesterol e diacilglicerol/colesterol livre) quando comparadas entre si e às células Huh7 parentais. No entanto, a sublinhagem clonal Huh7-ΔTip47-E7 parece apresentar GL menores do que as células controle, o que não foi observado nas sublinhagens policlonais. Quanto aos efeitos da infecção por DENV, vimos que a expressão de Tip47 não é alterada nas células Huh7 no tempo de 24 h.p.i. (pico de replicação do DENV nessas células, tempo adotado em todos os ensaios). A sublinhagem clonal Huh7-ΔTip47-E7, mas não a Huh7-ΔTip47-policlonal, teve menor capacidade de produzir partículas virais viáveis e reduzida porcentagem de infecção quando comparada às células controle. Quanto ao conteúdo intracelular de lipídeos, não identificamos diferenças em nenhuma das sublinhagens infectadas com mock ou DENV. Dessa forma, concluímos que Tip47 é importante para a ótima produção de DENV em células Huh7, sendo que isso não parece estar relacionado à função da Tip47 em controlar o conteúdo lipídico das GL. Além disso, a menor taxa de proliferação observada para o clone Huh7-ΔTip47-E7 parece não influenciar na menor replicação de DENV, uma vez que a infecção por outro vírus não relacionado, o MAYV, não foi afetada nessas células. Pode ser que alterações na morfologia de GL, o que parece ocorrer nas células depletadas para Tip47, influencie na menor produção de partículas virais nessas células. Uma outra possibilidade, nossa principal hipótese, é que as perilipinas (especialmente a Tip47) sejam determinantes para a localização de DENVC na superfície de GL, sendo essas nossas próximas investidas.	pt_BR
dc.publisher.country	Brasil	pt_BR
dc.publisher.department	Instituto de Microbiologia Paulo de Góes	pt_BR
dc.publisher.initials	UFRJ	pt_BR
dc.subject.cnpq	CNPQ::CIENCIAS BIOLOGICAS::MICROBIOLOGIA	pt_BR
dc.subject.cnpq	CNPQ::CIENCIAS BIOLOGICAS::IMUNOLOGIA	pt_BR
dc.embargo.terms	aberto	pt_BR
Appears in Collections:	Ciências Biológicas - Microbiologia e Imunologia

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