Desenvolvimento de uma plataforma carreadora de imunógenos heterólogos utilizando vesículas extracelulares fúngicas

Silva, Natália Martins da

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DC Field	Value	Language
dc.contributor.advisor	Nimrichter, Leonardo	-
dc.contributor.author	Silva, Natália Martins da	-
dc.date.accessioned	2022-12-02T14:34:07Z	-
dc.date.available	2023-12-21T03:09:38Z	-
dc.date.issued	2018-12-07	-
dc.identifier.citation	SILVA, N. M. da. (2018). Desenvolvimento de uma plataforma carreadora de imunógenos heterólogos utilizando vesículas extracelulares fúngicas [Trabalho de Conclusão de Curso, Universidade Federal do Rio de Janeiro]. Repositório Institucional Pantheon.	pt_BR
dc.identifier.uri	http://hdl.handle.net/11422/19300	-
dc.language	por	pt_BR
dc.publisher	Universidade Federal do Rio de Janeiro	pt_BR
dc.rights	Acesso Aberto	pt_BR
dc.subject	Vesículas extracelulares	pt_BR
dc.subject	Saccharomyces cerevisiae	pt_BR
dc.subject	Ovalbumina	pt_BR
dc.subject	Extracellular vesicles	pt_BR
dc.subject	Ovalbumin	pt_BR
dc.title	Desenvolvimento de uma plataforma carreadora de imunógenos heterólogos utilizando vesículas extracelulares fúngicas	pt_BR
dc.type	Trabalho de conclusão de graduação	pt_BR
dc.contributor.authorLattes	http://lattes.cnpq.br/5982751014439835	pt_BR
dc.contributor.advisorCo1	Piffer, Alicia Corbellini	-
dc.contributor.referee1	Santos, André Luis Souza dos	-
dc.contributor.referee2	Matassoli, Flávio Lemos	-
dc.contributor.referee3	Balancin, Juliana Aparecida Rizzo	-
dc.contributor.referee4	Filardy, Alessandra D'Almeida	-
dc.description.resumo	Infecções fúngicas sistêmicas vem emergindo ao longo das últimas décadas, acometendo principalmente indivíduos imunocomprometidos. Os fármacos disponíveis atualmente apresentam efeitos colaterais significativos e diversos casos de resistência, além de serem utilizados em protocolos longos, caros e com interações medicamentosas frequentes e perigosas. Por isso, a busca por novas alternativas terapêuticas é urgente. Estudos avaliam a utilização de anticorpos monoclonais e peptídeos antifúngicos. No entanto, esses métodos esbarram, respectivamente, em problemas como baixo espectro de ação e elevado custo. Nesse cenário, a busca por vacinas antifúngicas vem sendo estimulada. Vacinas com “antígeno único” são atualmente utilizadas em testes clínicos; no entanto, problemas de eficácia são observados devido a variabilidade genética e imunológica das diferentes populações, além da própria plasticidade das cepas fúngicas. As propostas atuais sugerem o uso de vacinas multivalentes com forte componente CD8+ e capazes de promover uma resposta de memória frente a diferentes espécies fúngicas. Resultados do nosso grupo mostram que vesículas extracelulares (VEs) produzidas por Cryptococcus neoformans e Candida albicans são capazes de modular a atividade de fagócitos, levando a produção de óxido nítrico e citocinas pró inflamatórias, além de promover a expressão de moléculas co estimulatórias em células dendríticas. Além disso, dados não publicados do grupo, demonstram que a vacinação de camundongos com VEs de C. albicans protegeu os animais de um posterior desafio letal, mesmo na ausência de adjuvantes. Em conjunto, esses resultados sugerem que esses compartimentos ativam a resposta imune inata e pode mediar a resposta adaptativa, suportando o uso das VEs fúngicas como formulações vacinais multiantigênicas. O objetivo deste projeto é desenvolver um modelo de expressão de imunógenos heterólogos carreados por VEs utilizando Saccharomyces cerevisiae, um fungo de fácil manipulação genética e cultivo. A cepa S288C de S. cerevisiae foi transformada com plasmídeo pRS416 contendo sequências quiméricas para expressão da proteína Ovalbumina (OVA) sob regulação de um promotor constitutivo do gene ADH1 de S. cerevisiae. Três sequências foram utilizadas: (i) a sequência completa, chamada solúvel (sOVA), (ii) uma sequência truncada que direciona a proteína preferencialmente para o citoplasma (cOVA), (iii) uma sequênca também truncada, com uma sequência de ferritina adicionada, que direciona a proteína para a membrana (mOVA). A transformação foi realizada pelo método LiAc (acetato de lítio) e a confirmação da expressão de OVA investigada por Western Blot e Imunofluorescência. A expressão da proteína foi confirmada em leveduras de S. cerevisiae sOVA e cOVA, mas somente nas VEs de sOVA. Como já observado para VEs de C. albicans e C. neoformans, VEs de S. cerevisiae foram internalizadas por macrófagos murinos primários. Além disso, VEs de S. cerevisiae induziram a produção de óxido nítrico por macrófagos primários murinos e aumentaram a expressão das moléculas coestimulatórias CD86 e MHC II por células dendríticas. VEs de sOVA aumentaram significativamente a secreção de IL-6 por macrófagos. Células dendríticas, por outro lado, secretaram IL-6 quando incubadas com VEs de vOVA e sOVA. Nossos resultados confirmam ser possível a manipulação do conteúdo proteico de VEs fúngicas. Inserir antígenos nestes compartimentos pode ser uma alternativa para potencializar suas propriedades imunogênicas e seu uso como plataforma vacinal.	pt_BR
dc.publisher.country	Brasil	pt_BR
dc.publisher.department	Instituto de Microbiologia Paulo de Góes	pt_BR
dc.publisher.initials	UFRJ	pt_BR
dc.subject.cnpq	CNPQ::CIENCIAS BIOLOGICAS::MICROBIOLOGIA	pt_BR
dc.subject.cnpq	CNPQ::CIENCIAS BIOLOGICAS::IMUNOLOGIA	pt_BR
dc.embargo.terms	aberto	pt_BR
Appears in Collections:	Ciências Biológicas - Microbiologia e Imunologia

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