Estabelecimento de modelo in vitro para avaliação da infecção e ativação de células de endotélio microvascular cerebral humano por SARS-CoV-2

Souza, Gabriela Lisboa e

Please use this identifier to cite or link to this item: http://hdl.handle.net/11422/23926

Full metadata record

DC Field	Value	Language
dc.contributor.advisor	Arruda, Luciana Barros de	-
dc.contributor.author	Souza, Gabriela Lisboa e	-
dc.date.accessioned	2024-10-10T15:10:08Z	-
dc.date.available	2024-10-12T03:00:14Z	-
dc.date.issued	2023-11-30	-
dc.identifier.citation	SOUZA, Gabriela Lisboa e. Estabelecimento de modelo in vitro para avaliação da infecção e ativação de células de endotélio microvascular cerebral humano por SARS-CoV-2. 2023. 44 f. Trabalho de Conclusão de Curso (Bacharelado em Ciências Biológicas: Microbiologia e Imunologia) - Instituto de Microbiologia Paulo de Góes, Universidade Federal do Rio de Janeiro, Rio de Janeiro, 2023.	pt_BR
dc.identifier.uri	http://hdl.handle.net/11422/23926	-
dc.language	por	pt_BR
dc.publisher	Universidade Federal do Rio de Janeiro	pt_BR
dc.rights	Acesso Aberto	pt_BR
dc.subject	Células endoteliais	pt_BR
dc.subject	COVID-19	pt_BR
dc.subject	Pseudovírus	pt_BR
dc.subject	Endothelial cells	pt_BR
dc.subject	ACE-2	pt_BR
dc.title	Estabelecimento de modelo in vitro para avaliação da infecção e ativação de células de endotélio microvascular cerebral humano por SARS-CoV-2	pt_BR
dc.type	Trabalho de conclusão de graduação	pt_BR
dc.contributor.authorLattes	http://lattes.cnpq.br/9315518531146354	pt_BR
dc.contributor.advisorCo1	Antunes, Sharton Vinícius Coelho	-
dc.contributor.referee1	Carneiro, Letícia de Albuquerque Maranhão	-
dc.contributor.referee2	Domitrovic, Tatiana	-
dc.contributor.referee3	Silva, Gustavo P. D.	-
dc.description.resumo	A COVID-19, causada pela infecção do SARS-CoV-2, é caracterizada por lesão pulmonar, com infiltração alveolar de células imunes, aumento dos níveis circulantes de citocinas como IL-6 e TNF, e por síndrome pró-trombogênica. A ativação de células endoteliais associado a evidências histopatológicas de endotelite, tem sido sugerida como um dos eventos associados ao aumento da resposta inflamatória resultando em edema alveolar e infiltrado celular no pulmão. Entretanto, a infecção produtiva de células endoteliais por SARS-CoV-2 ainda é controversa. Embora tenha sido demonstrado a presença de antígenos virais em células endoteliais de diferentes tecidos, tanto em análises post mortem, quanto em modelos in vitro, nenhum desses trabalhos demonstrou se o ciclo replicativo é completo e se ocorre a liberação de partículas virais infecciosas. Nosso grupo investiga há mais de dez anos o efeito da replicação de diferentes vírus sobre a ativação e permeabilidade de células endoteliais e, no presente trabalho, avaliamos se a linhagem de endotélio microvascular cerebral humano (HBMECs) são susceptíveis e permissivas ao SARS-CoV-2 e se a infecção impacta a fisiologia dessas células. Inicialmente, avaliamos a expressão do receptor viral ACE-2 e da molécula CD147, também descrita como receptor alternativo para entrada do vírus. Observamos que HBMECs expressam baixos níveis de ACE-2, mas níveis semelhantes de CD147 em relação a outros modelos celulares já bem caracterizados de replicação viral. Além disso, não detectamos a presença de partículas virais infecciosas no sobrenadante das células sugerindo que as HBMECs não são produtivamente infectadas. A partir desses resultados hipotetizamos que a baixa expressão de ACE-2 na superfície dessas células estaria impactando na sua capacidade de replicação do SARS-CoV-2. Para investigar essa hipótese, nosso grupo construiu um vetor lentiviral carreando a sequência de ACE-2 humana (denominado P-ACE-2), e o mesmo foi utilizado como ferramenta para induzir a superexpressão de ACE-2 em HBMECs. Observamos que a nossa ferramenta foi capaz de transduzir de forma eficiente o mRNA da ACE-2 humana nas HBMECs, promovendo o aumento da expressão proteica na superfície das células. Foi realizada uma cinética da viabilidade das HBMECs infectadas com diluições de P-ACE-2 em paralelo à análise da expressão de ACE-2 nas mesmas condições para definirmos a concentração de uso ideal que não provocasse a queda da viabilidade das HBMECs, mas que ainda fosse suficiente para promover a superexpressão de ACE-2 nas células. Após a padronização do pseudovírus, com a superexpressão do receptor de entrada do vírus, observamos que as HBMECs passaram a ser permissivas à infecção pelo SARS-CoV-2, demonstrado pelo aumento da expressão de RNA genômico intracelular, subgenômico e liberação de partículas infecciosas no sobrenadante, quando comparados às células que não superexpressam ACE-2. Por fim, observamos que a infecção viral induziu aumento da expressão de transcritos de IL-8 HBMECs superexpressando ou não ACE-2, sugerindo que a ativação das células independe da superexpressão de ACE-2. Em conjunto, nossos resultados demonstram que esse modelo pode ser utilizado como ferramenta para compreender o perfil de ativação das células endoteliais infectadas pelo vírus e quais as suas consequências.	pt_BR
dc.publisher.country	Brasil	pt_BR
dc.publisher.department	Instituto de Microbiologia Paulo de Góes	pt_BR
dc.publisher.initials	UFRJ	pt_BR
dc.subject.cnpq	CNPQ::CIENCIAS BIOLOGICAS::MICROBIOLOGIA	pt_BR
dc.subject.cnpq	CNPQ::CIENCIAS BIOLOGICAS::IMUNOLOGIA	pt_BR
dc.embargo.terms	aberto	pt_BR
Appears in Collections:	Ciências Biológicas - Microbiologia e Imunologia

Files in This Item:

File	Description	Size	Format
GLSouza.pdf		1.11 MB	Adobe PDF	View/Open

Show simple item record Recommend this item View Statistics

Pantheon Institutional repository