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http://hdl.handle.net/11422/25212| Type: | Trabalho de conclusão de graduação |
| Title: | Investigação de vesículas extracelulares de Corynebacterium diphtheriae e sua atividade biológica em diferentes células |
| Author(s)/Inventor(s): | Barbosa, Luiza de Souza |
| Advisor: | Moreira, Lilian de Oliveira |
| Co-advisor: | Olsen, Priscilla Christina |
| Abstract: | Corynebacterium diphtheriae (Cdi) é o agente etiológico da difteria, uma doença respiratória. O principal fator de virulência de Cdi é a toxina diftérica (DT), que é utilizada na formulação da vacina DTP após modificações estruturais. Apesar do sucesso da vacina, um aumento no número de casos da doença tem sido relatado. É importante destacar que a vacinação contra a DT pode proteger contra cepas toxigênicas, mas pouco se sabe sobre seu efeito em cepas não toxigênicas, o que estimula o estudo de outros fatores de virulência bacteriana além da DT. O Cdi possui outros fatores de virulência, como adesinas, neuraminidases e sideróforos. No entanto, pouco se sabe sobre a interação dessas moléculas com o hospedeiro. É sabido que as bactérias podem liberar vesículas extracelulares (VEs) contendo diferentes moléculas, como fatores de virulência, com um papel na fisiologia bacteriana, patogênese e modulação imunológica. Nosso trabalho teve como objetivo isolar VEs de Cdi e avaliar seu conteúdo e capacidade de modular diferentes células. Para isso, as CdiVEs foram concentradas a partir do sobrenadante bacteriano das amostras de Cdi ATCC 27010, não produtora de DT, e ATCC 27012, produtora de DT, usando um sistema VivaFlow e ultracentrifugação. O tamanho e a forma das CdiVEs da cepa atoxinogênica foram analisadas por Particle Metrix e microscopia eletrônica de transmissão (TEM). O conteúdo proteico da cepa atoxingênica foi avaliado por SDS-PAGE e através de uma análise de proteômica. A pesquisa da presença da DT nas CdiVEs da cepa toxinogênica foi realizada por Western blotting (WB) usando anticorpo monoclonal anti-toxina diftérica. O efeito das CdiVEs das cepas toxinogênica e atoxinogênica na atividade metabólica celular foi testada em macrófagos RAW ATCC 264.7 e AMJ2C11 ATCC CRL-2456, epitélio renal VERO ATCC CRL1586 e pneumócitos ATCC A549 CCL-185. Para a avaliação da ativação e modulação de macrófagos, as células RAW ATCC 264.7 e AMJ2C11 ATCC CRL-2456 foram estimuladas com CdiVEs e o óxido nítrico (NO), TNF-, IL-12 e IL- 10 foram dosados. As CdiVEs foram isoladas com sucesso pela primeira vez e, as análises estruturais por TEM e Particle Metrix mostram VEs com tamanhos que variam de 15 a 315 nm e tamanho médio de 92.8 nm. Surpreendentemente, a análise por WB revelou a presença de DT nas CdiVEs. A análise preliminar de proteômica mostrou em torno de 123 proteínas, incluindo fatores de virulência. As CdiVEs reduziram a atividade metabólica das células RAW após 24h do estimulo, mas não reduziram a atividade metabólica após 72h. As CdiVEs não diminuíram a viabilidade das células A549 e AMJ após 24h do estímulo. A atividade metabólica das células VERO foi reduzida somente em 96h., independentemente da presença de DT nas CdiVEs. O estímulo dos macrófagos RAW264.7 com CdiVEs por 24h levou à produção de NO e TNF-α, mas não de IL-12 e IL-10. Nossos achados mostram que o Cdi é capaz de produzir VEs que carreiam diferentes moléculas, incluindo a DT, com potencial modulatório em células do hospedeiro, oferecendo novas perspectivas sobre a patogênese da difteria e possíveis alvos terapêuticos. |
| Keywords: | Vesículas extracelulares Toxina diftérica Modulação imunológica Extracellular vesicles Diphtheria toxin Immune modulation |
| Subject CNPq: | CNPQ::CIENCIAS BIOLOGICAS::MICROBIOLOGIA CNPQ::CIENCIAS BIOLOGICAS::IMUNOLOGIA |
| Production unit: | Instituto de Microbiologia Paulo de Góes |
| Publisher: | Universidade Federal do Rio de Janeiro |
| Issue Date: | 3-Dec-2024 |
| Publisher country: | Brasil |
| Language: | por |
| Right access: | Acesso Aberto |
| Citation: | BARBOSA, L. de S. (2024). Investigação de vesículas extracelulares de Corynebacterium diphtheriae e sua atividade biológica em diferentes células [Trabalho de Conclusão de Curso, Universidade Federal do Rio de Janeiro]. Repositório Institucional Pantheon. |
| Appears in Collections: | Ciências Biológicas - Microbiologia e Imunologia |
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