Avaliação de moléculas de siRNA na linhagem celular A549 visando tratamento futuro de câncer de pulmão

Arcanjo, Gabriela Ribeiro

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			http://hdl.handle.net/11422/25956

Type:	Trabalho de conclusão de graduação
Title:	Avaliação de moléculas de siRNA na linhagem celular A549 visando tratamento futuro de câncer de pulmão
Author(s)/Inventor(s):	Arcanjo, Gabriela Ribeiro
Advisor:	Souza, Marcio Nele de
Co-advisor:	Carneiro, Flávia Raquel Gonçalves
Co-advisor:	Ferraz, Helen Conceição
Abstract:	O câncer de pulmão é uma das principais causas de mortalidade por câncer no mundo. O tratamento envolve estratégias como cirurgia, quimioterapia, radioterapia e terapias-alvo. No entanto, a eficácia dos tratamentos convencionais é limitada, especialmente em estágios avançados, devido à alta taxa de resistência a drogas e à complexidade molecular da doença. Neste contexto, a proteína HSP90AB1, um membro da família de choque térmico, tem sido investigada por seu papel crucial na estabilidade e função de várias proteínas envolvidas na proliferação celular e sobrevivência das células cancerígenas. O objetivo deste trabalho é avaliar o impacto do silenciamento do gene HSP90AB1 em células de câncer de pulmão utilizando como estratégia a transfecção com moléculas de siRNA específicas para esse alvo, visando o encapsulamento dessas moléculas em nanopartículas. Por meio da redução dos níveis dessa proteína, buscou-se observar alterações fenotípicas nas células por meio da linhagem celular de adenocarcinoma humano de pulmão A549. As células foram cultivadas em meio DMEM suplementado com 10% de soro fetal bovino e mantidas a 37°C em atmosfera de 5% de CO2. Para o silenciamento do gene HSP90AB1, as moléculas de siRNA foram transfectadas utilizando-se o reagente Lipofectamine® RNAiMAX como veículo de entrega para as células. A eficiência da transfecção foi avaliada previamente por citometria de fluxo pelo grupo através de moléculas de siRNA marcadas com o fluoróforo Cy5 após 48 h. Já os níveis da proteína HSP90AB1 foram avaliados nos tempos de 48, 72 e 96 h após a transfecção por meio da técnica de western blot. Para essa análise, as proteínas foram extraídas, separadas por eletroforese em gel de poliacrilamida e transferidas para membrana de PVDF. A detecção foi feita utilizando anticorpo específico para a HSP90AB1. Além disso, a proliferação celular foi avaliada em intervalos de 48, 72 e 96 horas após a transfecção por meio da técnica de contagem celular com o auxílio do corante azul de tripan. O silenciamento obtido foi eficiente, conforme observado pela diminuição significativa dos níveis da proteína, em comparação com o grupo controle, que recebeu moléculas de siRNA que não apresentam alvo nas células de mamífero. A avaliação fenotípica revelou uma diminuição na proliferação celular após 48 h de transfecção com duas sequências de siRNA, com redução do número de células em 35,29% e 31,84% para as sequências #1 e #2, respectivamente e de 17,76% e 24,02% para 72 h. Entretanto, apenas se observou diferença estatisticamente significante para o tempo de 72 h entre o controle e a sequência #2. Os resultados preliminares indicam que as moléculas de siRNA testadas são capazes de reduzir os níveis de HSP90AB1 levando a um fenótipo detectável, porém brando. Portanto, é necessário concluir ensaios complementares, como de viabilidade, apoptose e ciclo celular. Avaliar o fenótipo celular combinando o silenciamento de HSP90AB1 com outros genes potencialmente relevantes para o câncer de pulmão também é uma possibilidade para o futuro. Ensaios preliminares de encapsulamento do gene em nanopartículas poliméricas de quitosana demonstraram o potencial de aplicação em terapia gênica.
Keywords:	Neoplasias pulmonares Tratamento de câncer Terapia gênica
Subject CNPq:	CNPQ::ENGENHARIAS::ENGENHARIA BIOMEDICA::ENGENHARIA MEDICA
Production unit:	Escola de Química
Publisher:	Universidade Federal do Rio de Janeiro
Issue Date:	14-Feb-2025
Publisher country:	Brasil
Language:	por
Right access:	Acesso Aberto
Appears in Collections:	Engenharia de Bioprocessos

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