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http://hdl.handle.net/11422/28464
| Type: | Trabalho de conclusão de graduação |
| Title: | Estudo da atividade inibidora de proteases de extrato de Crotalaria juncea L. como insumos farmacêuticos ativos para o tratamento de câncer |
| Author(s)/Inventor(s): | Carvalho, Marina França |
| Advisor: | López, Raquel Elisa da Silva |
| Co-advisor: | Ferreira, Patrícia Fernandes |
| Abstract: | Os adenocarcinomas de cólon e de pulmão são as neoplasias com os maiores registros de mortes anuais no mundo, pois possuem caráter maligno e agressivo. Esse comportamento tumoral deve-se aos seus fatores de virulência, como as suas proteases. Estas enzimas participam da invasão tumoral pela degradação da matriz extracelular (MEC), na formação de metástases, no desenvolvimento de novos vasos sanguíneos no tumor (angiogênese), liberação de fatores de crescimento e de citocinas da MEC. Os inibidores de proteases (IPs) regulam o metabolismo de proteínas e são amplamente encontrados em plantas com elevado teor proteico, como nas leguminosas. Sendo assim, o objetivo deste trabalho consistiu em caracterizar a atividade inibitória de um extrato aquoso fosfato de uma espécie de leguminosa, a Crotalaria juncea, e purificar e caracterizar a atividade de um IP do tipo tripsina, o CJPi, bem como sua citotoxicidade para macrófagos e células tumorais. Para isto, um extrato foi preparado a partir de folhas frescas de C. juncea pulverizadas com N2, usando tampão fosfato de sódio 50 mM pH 6,5 como sistema extrator das proteínas, liofilizado e denominado CJ-P. A concentração de proteínas foi estimada pelo método de Bradford e o CJPi foi purificado por cromatografia de afinidade em Tripsina-Agarose. A atividade IP foi ensaiada usando proteases de referência: tripsina, quimotripsina, pepsina, papaína e colagenase em solução e por zimograma contra a tripsina. Os perfis proteicos do CJ-P e CJPi foram analisados em gel de eletroforese (SDS-PAGE) e as linhagens de macrófagos (J774 1.6) e de adenocarcinomas de cólon (Caco-2) e de pulmão (A549) foram cultivadas em meio DMEM. O rendimento de obtenção do CJ-P foi de 1,26%, ele tem cerca de 17,55% de proteínas com bandas majoritárias de 44 a 12 kDa. O CJ-P teve atividade inibitória contra todas as proteases, exceto papaína, e a maior inibição foi observada contra tripsina (76,4%). O SDS-PAGE revelou apenas uma única banda de proteína de 19 kDa no CJPi em condições redutoras e não redutoras, logo, ele foi purificado com apenas um passo cromatográfico. O zimograma do CJ-P revelou bandas de atividade contra a tripsina de 22 e 26 kDa em condição redutora. O CJPi inibiu apenas a atividade da tripsina (44,4%), uma perda de inibição de ~32% em relação ao extrato de origem. O CJ-P tem alto teor proteico e é fonte de IPs de várias classes de proteases e, a partir dele, foi purificado um inibidor específico de tripsina com apenas um passo cromatográfico. A facilidade de obtenção do CJ-P e CJPi, seus expressivos teores proteicos e atividades IP fazem destes insumos farmacêuticos ativos vegetais atrativos para serem explorados no tratamento de cânceres onde a atividade proteolítica é um fator de virulência importante para a progressão da doença. |
| Keywords: | Adenocarcinoma Peptídeo hidrolases Inibidores da tripsina Peptide hydrolases Trypsin inhibitors |
| Subject CNPq: | CNPQ::CIENCIAS BIOLOGICAS::MICROBIOLOGIA CNPQ::CIENCIAS BIOLOGICAS::IMUNOLOGIA |
| Production unit: | Instituto de Microbiologia Paulo de Góes |
| Publisher: | Universidade Federal do Rio de Janeiro |
| Issue Date: | 27-Nov-2025 |
| Publisher country: | Brasil |
| Language: | por |
| Right access: | Acesso Aberto |
| Citation: | Carvalho, M. F. (2025). Estudo da atividade inibidora de proteases de extrato de Crotalaria juncea L. como insumos farmacêuticos ativos para o tratamento de câncer [Trabalho de Conclusão de Curso, Universidade Federal do Rio de Janeiro]. Repositório Institucional Pantheon. |
| Appears in Collections: | Ciências Biológicas - Microbiologia e Imunologia |
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