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http://hdl.handle.net/11422/28467
| Type: | Trabalho de conclusão de graduação |
| Title: | O meio líquido CDM (Chemically Defined Medium) como base para o crescimento de Neisseria gonorrhoeae |
| Author(s)/Inventor(s): | Rosa, Matheus Henrique Banchete |
| Advisor: | Bonelli, Raquel Regina |
| Abstract: | Neisseria gonorrhoeae causa a infecção sexualmente transmissível gonorreia. Fastidiosa, é considerada uma bactéria de difícil recuperação e manutenção, e seu cultivo exige meios de cultivo e condições de incubação especiais. Relatos de cultivo de gonococos em meios líquidos são esparsos na literatura científica, com poucos registros vinculados a laboratórios brasileiros. O Laboratório de Investigação em Microbiologia Médica (LIMM) desenvolve estudos com N. gonorrhoeae há mais de 10 anos e não possui qualquer experiência prévia no que diz respeito ao cultivo de gonococos em caldo. No entanto, entende-se que conseguir cultivar este microrganismo em meio líquido é uma etapa essencial para que se possa realizar projetos que incluam cultura de células e avaliação transcriptômica. Adicionalmente, meios líquidos são, na microbiologia clássica, considerados melhores que os sólidos para a recuperação de células bacterianas enfraquecidas, e seria bom poder investigar o potencial de um caldo para esta finalidade, uma vez que frequentemente cepas gonocócicas começam, após alguns ciclos de repique, a apresentar menor crescimento, até ficarem totalmente inviáveis. Neste trabalho propomos a utilização de um caldo descrito por Morse e Bartestein (1980), com adaptações, aqui referido como Chemically Defined Medium (CDM) para o cultivo de gonococos. Trata-se de um meio minimamente definido que inclui em sua composição glicose, 22 aminoácidos, 4 vitaminas, 8 tipos de sais e dois sistemas tamponantes; os componentes foram preparados separadamente em condições que garantiram sua solubilidade e estabilidade frente à necessidade de esterilização e armazenamento. A mistura foi preparada imediatamente antes de cada uso e esterilizada por filtração, que seguiu com alíquotas de 10 mL em tubos Falcon de 50 mL. Foi avaliada a eficácia do meio em permitir o crescimento da cepa N. gonorrhoeae ATCC49226 em 10 mL de CDM incubado em atmosfera convencional a 36°C sob agitação (120 rpm) com inclinação de 45°. Curvas de crescimento a partir de inóculos iniciais 103 UFC/mL, 105 UFC/mL e 107 UFC/mL foram determinadas pelo monitoramento do crescimento nos tempos de incubação 0, 3, 6, 9, 12 e 24 horas por contagem de UFCs em ágar chocolate em triplicatas técnicas e biológicas. Microscopia eletrônica foi aplicada para avaliar o padrão de crescimento das colônias nestas condições de incubação. Como resultado, os inóculos de 103 e 105 UFC/mL apresentaram fases exponenciais mais longas do que que o inóculo de 107 UFC/mL. A partir de todos os inóculos foi observado crescimento exponencial por pelo menos 12 horas de incubação, com contagem final acima de 8 log. Nossos resultados também apontaram que o meio CDM permitiu o crescimento de gonococos partir de culturas enfraquecidas ou inóculos mínimos como os obtidos de culturas contaminadas. No CDM observou-se um padrão de crescimento de células mais livres ou em agregados menores do que os obtidos pela ressuspensão do crescimento de colônias em meio sólido. Estas características e o domínio sobre a preparação e utilização do CDM trouxeram ao LIMM a possibilidade de realizar novos projetos de pesquisa e ganhar versatilidade nas estratégias adotadas ao cultivo de gonococos. |
| Keywords: | Neisseria gonorrhoeae Microscopia eletrônica de transmissão |
| Subject CNPq: | CNPQ::CIENCIAS BIOLOGICAS::MICROBIOLOGIA CNPQ::CIENCIAS BIOLOGICAS::IMUNOLOGIA |
| Production unit: | Instituto de Microbiologia Paulo de Góes |
| Publisher: | Universidade Federal do Rio de Janeiro |
| Issue Date: | 26-Nov-2025 |
| Publisher country: | Brasil |
| Language: | por |
| Right access: | Acesso Aberto |
| Citation: | Rosa, M. H. B. (2025). O meio líquido CDM (Chemically Defined Medium) como base para o crescimento de Neisseria gonorrhoeae [Trabalho de Conclusão de Curso, Universidade Federal do Rio de Janeiro]. Repositório Institucional Pantheon. |
| Appears in Collections: | Ciências Biológicas - Microbiologia e Imunologia |
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