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http://hdl.handle.net/11422/20257| Type: | Dissertação |
| Title: | Concentração de partículas pseudovirais de Zika vírus por ultrafiltração |
| Author(s)/Inventor(s): | Zamprognio, Maycou Soares |
| Advisor: | Castilho, Leda dos Reis |
| Co-advisor: | Ferraz, Helen Conceição |
| Abstract: | Este trabalho investigou a separação de partículas pseudovirais (VLPs) de Zika vírus contidas em sobrenadante de cultivo celular através da operação de ultrafiltração. As VLPs foram produzidas por células da linhagem HEK293 - 3F6 (Human Embryonic Kidney cells) transfectadas com o vetor plasmidial comercial PCI-NEO® (Promega) contendo as sequências genéticas referentes às proteínas estruturais de pré-membrana (pr-M) e envelope (E) do vírus Zika. As técnicas utilizadas neste estudo compreenderam análises qualitativas, a partir dos métodos de Immunoblot, SDS-PAGE e Western blot; quantificação de proteínas, através de testes de densitometria e Bradford; bem como análise da distribuição de tamanho de partículas, ao utilizar a metodologia de HPLC/SEC-UV. Operações em bateladas sequenciais de 14 mL em dispositivo Vivaspin® contendo membranas de poliétersulfona (PES) com massa molecular de corte de 300 kDa e 1000 kDa foram investigadas e a membrana de menor cut-off apresentou maior eficiência de separação. Desta forma, os estudos posteriores em célula de ultrafiltração agitada Amicon® avaliou o emprego das membranas de PES de 500 kDa e celulose regenerada (RC) de 100 kDa, no qual a membrana de PES de 500 kDa apresentou qualitativamente melhor desempenho na retenção e concentração das VLPs. |
| Abstract: | This work assessed the separation of virus-like particles (VLPs) through ultrafiltration operation. The VLPs were constitutively expressed by HEK293 - 3F6 cell line (Human Embryonic Kidney cells) transfected with commercial plasmidial vector PCINEO® (Promega) encoding the genetic sequences of premembrane (pr-M) and envelope (E) structural proteins of Zika virus. The assessment techniques were based on qualitative analysis, such as the Immunoblot test, SDS-PAGE and Western blot; protein quantification, through densitometry and Bradford assays; and the particle diameter distribution analysis by using HPLC/SEC-UV. Sequential batches of 14 mL in Vivaspin® devices embedded with polyethersulfone of 300 kDa and 1000 kDa membranes were analyzed and better performance was achieved with the lowest cut-off. Therefore, batch operations in agitated Amicon® cell filled with 200 mL of clarified supernant were conducted with 500 kDa polyethersulfone and 100 kDa regenerated cellulose membranes. Despite both membranes showing concentration capacity to Zika virus-like particles, the PES membrane displayed higher efficiency. |
| Keywords: | Flavivírus Zika Partícula pseudoviral Concentração |
| Subject CNPq: | CNPQ::ENGENHARIAS::ENGENHARIA QUIMICA::PROCESSOS INDUSTRIAIS DE ENGENHARIA QUIMICA::PROCESSOS BIOQUIMICOS |
| Program: | Programa de Pós-Graduação em Engenharia Química |
| Production unit: | Instituto Alberto Luiz Coimbra de Pós-Graduação e Pesquisa de Engenharia |
| Publisher: | Universidade Federal do Rio de Janeiro |
| Issue Date: | Feb-2019 |
| Publisher country: | Brasil |
| Language: | por |
| Right access: | Acesso Aberto |
| Appears in Collections: | Engenharia Química |
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