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http://hdl.handle.net/11422/15157| Type: | Trabalho de conclusão de graduação |
| Title: | Clonagem da celobiose desidrogenase 1 de neurospora crassa na levedura Pichia pastoris |
| Author(s)/Inventor(s): | Costa, Lucas Jorge Marianno |
| Advisor: | Medeiros, Marcelo Neves de |
| Abstract: | A celobiose desidrogenase (CDH) é uma oxidoredutase extracelular produzida por fungos lignocelulolíticos e com dois domínios distintos. Um grande domínio catalítico desidrogenase (DH) contendo FAD como cofator e um pequeno domínio citocromo (CYT) contendo o cofator heme-b, conectados por uma sequência linker. Em virtude das suas propriedades catalíticas tanto em solução quanto imobilizadas em superfícies condutoras, as CDHs têm um grande potencial para o desenvolvimento de biossensores e células de biocombustíveis por causa das suas habilidades de transferência direta de elétrons (DET) quando imobilizada, além do emprego em biorremediação de compostos aromáticos e deslignificação de biomassa celulósica através da ação redutora quando em solução. A expressão heteróloga da CDH utilizando a levedura Pichia pastoris é uma alternativa para a produção em larga escala. No entanto a alta taxa de glicosilação deste hospedeiro pode impactar nas propriedades cinéticas da CDH, inclusive na DET. Portanto, o objetivo do trabalho foi produzir heterologamente a CDH recombinante selvagem, para avaliar futuramente o seu desempenho. Para isto, o fragmento sintético de DNA que compõe a sequência da CDH de Neurospora crassa (NcCDH) foi adquirido comercialmente. As construções NcCDH wt (selvagem) e o vetor pPICZαC foram então clonadas em vetor de expressão induzida por metanol e transformadas em P. pastoris. Os resultados sugerem a transformação bem sucedida da Pichia pastoris X-33 com o vetor de expressão modulável por metanol contendo o gene da CDH1. O trabalho de expressão heteróloga está em andamento com uma estratégia para aprimorar o processo de fermentação e de purificação, desta forma, irá melhorar bastante o rendimento geral na obtenção das proteínas recombinantes de interesse no futuro. |
| Keywords: | Enzimas Bioquímica Pichia pastoris Glicosilação Leveduras Neurospora crassa |
| Subject CNPq: | CNPQ::CIENCIAS BIOLOGICAS::BIOQUIMICA |
| Production unit: | Instituto de Biologia |
| Publisher: | Universidade Federal do Rio de Janeiro |
| Issue Date: | 2019 |
| Publisher country: | Brasil |
| Language: | por |
| Right access: | Acesso Aberto |
| Citation: | COSTA, Lucas Jorge Marianno. Clonagem da celobiose desidrogenase 1 de Neurospora crassa na levedura Pichia pastoris. Trabalho de Conclusão de Curso (Licenciatura em Ciências Biológicas) - Instituto de Biologia, Universidade Federal do Rio de Janeiro, Rio de Janeiro, 2019. |
| Appears in Collections: | Ciências Biológicas |
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