Caracterização funcional de vírus-like particles de NωV produzidas em plantas

Ribeiro, Jonas Rafael Siqueira

Please use this identifier to cite or link to this item: http://hdl.handle.net/11422/17693

Type:	Trabalho de conclusão de graduação
Title:	Caracterização funcional de vírus-like particles de NωV produzidas em plantas
Author(s)/Inventor(s):	Ribeiro, Jonas Rafael Siqueira
Advisor:	Domitrovic, Tatiana
Abstract:	As partículas virais podem ser vistas como nanomáquinas altamente eficientes, capazes de encapsular o genoma, escapar do sistema imunológico, se anexar a células suscetíveis, e liberar o genoma e outros conteúdos da partícula no meio intracelular. Todos esses recursos podem ser aplicados à nanotecnologia, inspirando sistemas inovadores de entrega de ácido nucleico / drogas ou de apresentação de antígenos. Nós exploramos o uso de VLPs derivadas de um vírus de inseto não envelopado, Nudaurelia capensis Omega Virus (NωV), como nanopartícula capaz de carrear pequenas drogas. As VLPs de NωV contam com um peptídeo lítico capaz de penetrar eficientemente nas membranas celulares, evitando a via endocítica que muitas vezes dificulta a entrega de drogas ou genes. As VLPs de NωV apresentam as mesmas características biofísicas funcionais do vírion e são geradas por meio da expressão heteróloga da proteína do capsídeo em células de Spodoptera frugiperda usando um vetor de baculovírus. Recentemente, novos vetores de expressão em plantas permitem a produção de proteínas heterólogas com alto rendimento de forma simplificada e econômica, o que facilitaria uma futura aplicação de NωV como nanopartícula. O objetivo desse trabalho é produzir VLPs de NωV em Nicotiana benthamiana e caracterizar a sua maturação e atividade lítica. O gene da proteína de capsídeo de NωV foi clonado no vetor de expressão pEAQHT de Nicotiana benthamiana que combina um forte promotor para a produção do gene recombinante para à expressão da proteína p19 para supressão da resposta de ARN interferente da planta. Bactérias Agrobacterium tumefaciens foram transformadas com o vetor recombinante e utilizadas para agroinfiltração de folhas de N. benthamiana. Após 4 dias, as folhas agroinfiltradas foram colhidas, pesadas e trituradas em tampão de purificação. O extrato da folha filtrado foi ultracentrifugado contra gradiente contínuo de sacarose para isolamento das partículas. A análise do material por SDS-PAGE revelou uma banda pura de 70 kDa, o peso molecular esperado da proteína do capsídeo NωV. Além disso, as VLPs N⍵V derivadas de plantas mostraram maturação e propriedades líticas semelhantes às VLPs derivadas de insetos. Nosso trabalho confirmou a eficiência da expressão de N⍵V VLP em N. benthamiana usando o vetor pEAQHT e abre caminho para que outras partículas recombinantes de vírus eucarióticos sejam produzidas usando a mesma tecnologia.
Keywords:	Partículas semelhantes a vírus Nudaurelia capensis omega virus Biotecnologia Virus-like particle Biotechnology
Subject CNPq:	CNPQ::CIENCIAS BIOLOGICAS::MICROBIOLOGIA CNPQ::CIENCIAS BIOLOGICAS::IMUNOLOGIA
Production unit:	Instituto de Microbiologia Paulo de Góes
Publisher:	Universidade Federal do Rio de Janeiro
Issue Date:	10-Dec-2020
Publisher country:	Brasil
Language:	por
Right access:	Acesso Aberto
Citation:	RIBEIRO, J. R. S. (2020). Caracterização funcional de vírus-like particles de NωV produzidas em plantas [Trabalho de Conclusão de Curso, Universidade Federal do Rio de Janeiro]. Repositório Institucional Pantheon.
Appears in Collections:	Ciências Biológicas - Microbiologia e Imunologia

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