Regulação de genes relacionados à aquisição do fosfato na cianobactéria Raphidiopsis raciborskii: ligação do ativador transcricional ao DNA

Reis, Maria Eduarda Campos Castro dos

Please use this identifier to cite or link to this item: http://hdl.handle.net/11422/25183

Type:	Trabalho de conclusão de graduação
Title:	Regulação de genes relacionados à aquisição do fosfato na cianobactéria Raphidiopsis raciborskii: ligação do ativador transcricional ao DNA
Author(s)/Inventor(s):	Reis, Maria Eduarda Campos Castro dos
Advisor:	Pacheco, Ana Beatriz Furlanetto
Abstract:	Cianobactérias são microrganismos aeróbios, fotoautotróficos, comuns em ambientes aquáticos. A eutrofização artificial vem aumentando a concentração de nitrogênio e fósforo (N e P) nos corpos d 'água, induzindo seu crescimento que, em excesso, gera florações com alta densidade de células planctônicas. Raphidiopsis raciborskii é uma espécie de cianobactéria de distribuição mundial que possui diversas vantagens adaptativas, entre elas o armazenamento de fósforo (P). Como é capaz de fixar N, P torna-se o principal elemento limitante para seu crescimento. Bactérias sentem a concentração de P no ambiente por meio de proteínas receptoras de membrana (tipicamente PhoR) que transmitem sinal para proteínas efetoras citoplasmáticas (tipicamente PhoB) que regulam a transcrição gênica. Esse sistema de regulação chama-se regulon Pho e os genes envolvidos se relacionam com o metabolismo de fosfato, ex., o transportador de fosfato inorgânico PstS, além de outros que garantem aquisição, aproveitamento e estoque de P. O objetivo do trabalho é investigar a ligação do regulador transcricional PhoB de R. raciborskii a regiões regulatórias de genes envolvidos com o metabolismo de fosfato. Inicialmente, buscamos obter a proteína PhoB em sistema recombinante. Os métodos envolveram extração de DNA genômico de uma linhagem de R. raciborskii (ITEP), desenho de primers, amplificação do gene phoB por PCR, clonagem em vetor de expressão (pET28a), transformação de E. coli BL21DE3, indução da expressão e purificação de PhoB. Regiões regulatórias foram obtidas por amplificação de regiões a montante do operon phoBR e pstSCAB, ligação dos insertos em vetor (pGEMTeasy), transformação de E. coli DH5α e obtenção dos fragmentos marcados de DNA por PCR. Testes de interação proteína (PhoB) e DNA (regiões regulatórias de phoBR e pstSCAB) in vitro foram realizados por retardo de mobilidade eletroforética (Gel shift) e proteção da digestão por DNase (DNase footprint). Como resultados, expressamos e purificamos a proteína PhoB recombinante e clonamos as regiões regulatórias permitindo obter os fragmentos de DNA marcados para os testes de interação. Através de gel shift foi possível observar a interação da proteína PhoB às regiões intergênicas. Ensaios de DNase footprint também indicaram a interação mas precisam ser otimizados. O avanço deste estudo irá permitir o mapeamento do sítio de ligação de PhoB aos genes regulados permitindo a busca futura de novos genes do regulon deste ativador transcricional.
Keywords:	Regulação transcricional Fósforo Cianobactérias Transcriptional regulation Phosphorus Cyanobacteria
Subject CNPq:	CNPQ::CIENCIAS BIOLOGICAS::MICROBIOLOGIA CNPQ::CIENCIAS BIOLOGICAS::IMUNOLOGIA
Production unit:	Instituto de Microbiologia Paulo de Góes
Publisher:	Universidade Federal do Rio de Janeiro
Issue Date:	10-Dec-2024
Publisher country:	Brasil
Language:	por
Right access:	Acesso Aberto
Citation:	REIS, M. E. C. C. dos. (2024). Regulação de genes relacionados à aquisição do fosfato na cianobactéria Raphidiopsis raciborskii: ligação do ativador transcricional ao DNA [Trabalho de Conclusão de Curso, Universidade Federal do Rio de Janeiro]. Repositório Institucional Pantheon.
Appears in Collections:	Ciências Biológicas - Microbiologia e Imunologia

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