Investigação do efeito inibitório da Trealose-6-fosfato sobre as isoformas da hexoquinase de Saccharomyces Cerevisiae

Boechat, Fernanda Cigagna

Please use this identifier to cite or link to this item: http://hdl.handle.net/11422/5766

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DC Field	Value	Language
dc.contributor.advisor	Eleutherio, Elis Cristina de Araújo	-
dc.contributor.author	Boechat, Fernanda Cigagna	-
dc.date.accessioned	2018-11-15T22:25:35Z	-
dc.date.available	2023-12-21T03:03:23Z	-
dc.date.issued	2017-08-01	-
dc.identifier.uri	http://hdl.handle.net/11422/5766	-
dc.language	por	pt_BR
dc.publisher	Universidade Federal do Rio de Janeiro	pt_BR
dc.rights	Acesso Aberto	pt_BR
dc.subject	Saccharomyces Cerevisiae	pt_BR
dc.subject	Trealose-6-fosfato	pt_BR
dc.subject	Isoformas da Hexoquinase	pt_BR
dc.subject	Dissacarídeo.	pt_BR
dc.subject	Metabolismo fermentativo	pt_BR
dc.title	Investigação do efeito inibitório da Trealose-6-fosfato sobre as isoformas da hexoquinase de Saccharomyces Cerevisiae	pt_BR
dc.type	Trabalho de conclusão de graduação	pt_BR
dc.contributor.authorLattes	http://lattes.cnpq.br/7196315782042724	pt_BR
dc.contributor.advisorCo1	Almeida, Diego Seixas Gomes de	-
dc.contributor.referee1	Neves, Bianca Cruz	-
dc.contributor.referee1Lattes	http://lattes.cnpq.br/2924634223083790	pt_BR
dc.contributor.referee2	Freire, Denise Maria Guimarães	-
dc.contributor.referee2Lattes	http://lattes.cnpq.br/5284295521212505	pt_BR
dc.description.resumo	A trealose é um dissacarídeo encontrado em microrganismos, plantas e animais invertebrados, mas não em mamíferos, cuja função está relacionada à tolerância a condições de estresse. Além disso, estudos indicam que um dos intermediários metabólicos da síntese de trealose em Saccharomyces cerevisiae, a trealose-6-fosfato (T6P), exerce uma função inibitória sobre a hexoquinase 2 (Hxk2p), regulando o fluxo glicolítico nesta levedura. A isoforma hexoquinase 2 humana é altamente expressa em diversos tipos de tumores, sugerindo que esta proteína é um alvo interessante para desenvolvimento de novas terapias. Células tumorais apresentam fermentação aeróbica (efeito Warburg), um fenômeno similar ao que ocorre na levedura sob repressão catabólica (repressão da glicose sobre a respiração). Existe elevada homologia entre as isoformas das hexoquinases de S. cerevisiae (Hxk1, Hxk2 e Glk1) e as isoformas humanas. O objetivo deste trabalho é investigar o comportamento bioenergético de cepas de S. cerevisiae que expressem apenas uma das isoformas da hexoquinase e avaliar a atividade enzimática dessas isoformas em extratos celulares na ausência e na presença do inibidor T6P. Inicialmente construiu-se amplicons contendo marcadores auxotróficos via PCR que foram inseridos na levedura para deleção gênica direcionada via recombinação homóloga para obterse cepas duplamente deletadas que expressassem apenas uma das isoformas. Obteve-se êxito na obtenção das linhagens GLK1 Δhxk1 Δhxk2 e HXK2 Δhxk1 Δglk1. Em metabolismo fermentativo, a mutante GLK1 apresentou taxas de consumo de glicose e oxigênio quatro vezes menor e cinco vezes maior, respectivamente, que a cepa selvagem (WT) e a mutante HXK2, evidenciando o papel exercido pela Hxk2p no mecanismo de repressão catabólica. Apesar do consumo diferenciado, a atividade enzimática de hexoquinase nos extratos foi similar para todas as cepas, indicando que a célula mantém a taxa de fosforilação da glicose constante, independente da isoforma expressa. A glicose-6-fosfato é substrato não apenas para via glicolítica, mas também para outras vias, como a via das pentoses fosfato. Verificou-se ainda que T6P foi capaz de inibir Hxk2p, através de um mecanismo de inibição competitivo com a glicose, mas não Glk1p. Estes resultados parecem ser bastante promissores diante das notáveis semelhanças bioquímicas existentes entre a levedura e células animais. A clonagem de cada uma das isoformas HXK humanas na levedura S. cerevisiae Δhxk1 Δhxk2 Δglk1 poderia fornecer informações de grande relevância a respeito do efeito de T6P nas proteínas humanas visando possíveis aplicações terapêuticas.	pt_BR
dc.publisher.country	Brasil	pt_BR
dc.publisher.department	Instituto de Química	pt_BR
dc.publisher.initials	UFRJ	pt_BR
dc.subject.cnpq	CNPQ::CIENCIAS EXATAS E DA TERRA::QUIMICA	pt_BR
dc.subject.cnpq	CNPQ::CIENCIAS BIOLOGICAS::BIOQUIMICA	pt_BR
dc.embargo.terms	aberto	pt_BR
Appears in Collections:	Química

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