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http://hdl.handle.net/11422/8865| Especie: | Trabalho de conclusão de graduação |
| Título : | Estudo da estabilidade e especificidade de interação do domínio PWWP da histona metil-transferase NSD3 com peptídeos derivados de histonas |
| Autor(es)/Inventor(es): | Silva, Nathalia Lins da |
| Tutor: | Pinheiro, Anderson de Sá |
| Resumen: | NSD3 (Nuclear Receptor Binding SET-domain containing protein 3) é um membro da família NSD de histona metil-transferases humanas. NSD3 possui uma arquitetura modular formada por um domínio catalítico SET, dois domínios PWWP (Pro-Trp Trp-Pro) e cinco domínios dedos de zinco PHD. A superexpressão de NSD3S é suficiente para a aquisição de fenótipos tumorais por células epiteliais de mama, sugerindo que o domínio PWWP desempenha papel crucial na patogênese do câncer de mama. O presente trabalho teve como objetivo a determinação da especificidade de interação de NSD3-PWWP com peptídeos derivados de histonas, bem como caraterização da estabilidade deste domínio frente a diferentes condições experimentais, a fim de facilitar a sua determinação estrutural. A especificidade de interação de NSD3-PWWP com 9 peptídeos (13-mer) derivados de caudas amino-terminais de histonas foi investigada através de espectroscopia de fluorescência. O espectro de fluorescência intrínseca de NSD3-PWWP apresentou máximo de emissão em 344 nm, sugerindo que os resíduos de triptofano são parcialmente expostos ao solvente. A adição de concentrações crescentes de peptídeos promoveu a supressão da fluorescência de modo dose-dependente. As isotermas de ligação derivadas dos dados de fluorescência exibiram duas inflexões distintas, sugerindo dois sítios de ligação com afinidades diferentes. A interação de NSD3-PWWP com os diferentes peptídeos se deu com afinidades semelhantes (~3-10 micromolar), sugerindo que NSD3PWWP é capaz de reconhecer metil-lisinas com alta afinidade, porém com pouca seletividade. A fim de se determinar a estabilidade termodinâmica, NSD3-PWWP e NSD3PWWP:H3K36me3, foram submetidos ao ensaio de fluorimetria diferencial de varredura. Curvas de desnaturação térmica foram construídas em diferentes condições de pH e força iônica, a fim de determinar a condição ótima de estabilidade e solubilidade da proteína. NSD3PWWP livre se mostrou mais estável (Tm ~63°C) em condições de pH básico (>8,0) e alta força iônica (NaCl 250 mM). Por sua vez, o complexo NSD3-PWWP:H3K36me3 apresentou Tm ~73°C, sugerindo que a interação com o peptídeo estabiliza a proteína. |
| Materia: | Histonas Fluorescência |
| Materia CNPq: | CNPQ::CIENCIAS EXATAS E DA TERRA::QUIMICA CNPQ::CIENCIAS BIOLOGICAS::BIOQUIMICA |
| Unidade de producción: | Instituto de Química |
| Editor: | Universidade Federal do Rio de Janeiro |
| Fecha de publicación: | 27-jun-2019 |
| País de edición : | Brasil |
| Idioma de publicación: | por |
| Tipo de acceso : | Acesso Aberto |
| Aparece en las colecciones: | Química |
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