Pantheon Repositório Institucional da UFRJ
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http://hdl.handle.net/11422/17480| Tipo: | Trabalho de conclusão de graduação |
| Título: | Sensibilização alérgica in vivo como estratégia experimental de otimização do protocolo convencional in vitro de diferenciação eosinofílica: impacto na produtividade |
| Autor(es)/Inventor(es): | Garcia, Vitória Fernanda do Rosário |
| Orientador: | Melo, Christianne Bandeira de |
| Coorientador: | Tasmo, Natália Recardo Amorim |
| Resumo: | Eosinófilos apresentam desde funções citotóxicas efetoras em infecções helmínticas e reações alérgicas, quanto funções imunomodulatórias essenciais à homeostasia de tecidos como o gastrointestinal, adiposo e mamário. Estudos in vitro empregando eosinófilos murinos são essenciais para avançar na compreensão funcional desta célula. O protocolo de obtenção de eosinófilos murinos mais empregado atualmente é o descrito por Dyer e colaboradores (2008), permitindo obter ao final de 14 dias de cultura eosinófilos maduros com mais de 90% de pureza (fase inicial de proliferação de precursores induzida por SCF e FLT3-L, seguida de indução de diferenciação por IL-5). Embora eficiente, o protocolo ainda exibe limitações como o alto custo versus produtividade e a qualidade das células produzidas. Como estratégia de otimização, estudamos ajustes do protocolo padrão baseado no emprego de células de medula óssea de camundongos pré-sensibilizados com ovalbumina (modelo de inflamação alérgica), que hipotetizamos apresentar microambiente medular já pró-eosinopoiético. Para validar a existência deste microambiente pró-eosinopoiético, avaliamos, inicialmente, se a sensibilização alérgica induz eosinofilia medular e/ou alteração dos níveis medulares de mediadores próeosinopoiéticos. Nossos dados mostram que houve aumento da eosinofilia medular em animais sensibilizados quando comparados aos animais “naive”. Mais ainda, observamos elevação discreta dos níveis das citocinas IL-3, IL-5 e dos eicosanóides CysLTs e PGD2 (dosados por ELISA e EIA, respectivamente) no lavado medular dos animais BALB/c sensibilizados; indicando que a sensibilização de fato induziu instalação de microambiente medular próeosinopoiético in vivo. A sensibilização também promoveu alterações no protocolo in vitro de produção de eosinófilos, incluindo: (i) aumento nos números de eosinófilos ao final da fase inicial de proliferação (8 dias de cultura) nas culturas provenientes de animais sensibilizados; (ii) no 8º dia de cultura iniciada com células medulares de animal BALB/c sensibilizado, foi detectado intenso aumento na concentração de IL-3 no sobrenadante da cultura em comparação aos níveis de IL-3 encontrados nas culturas iniciadas com células medulares de camundongos BALB/c “naives”; e (iii) aos 14 dias de cultura, a produção total de eosinófilos mostrou-se aumentada nas culturas iniciadas a partir de animais sensibilizados. Nossos dados confirmam nossa hipótese de que a sensibilização alérgica in vivo de animais BALB/c corresponde à estratégia de baixo custo para otimização do protocolo de obtenção de eosinófilos murinos visando estudos funcionais in vitro. |
| Palavras-chave: | Eosinófilos Células-tronco embrionárias murinas Eosinofilia Eosinophils Mouse embryonic stem cells Eosinophilia |
| Assunto CNPq: | CNPQ::CIENCIAS BIOLOGICAS::MICROBIOLOGIA CNPQ::CIENCIAS BIOLOGICAS::IMUNOLOGIA |
| Unidade produtora: | Instituto de Microbiologia Paulo de Góes |
| Editora: | Universidade Federal do Rio de Janeiro |
| Data de publicação: | 11-Mar-2022 |
| País de publicação: | Brasil |
| Idioma da publicação: | por |
| Tipo de acesso: | Acesso Aberto |
| Citação: | GARCIA, V. F. do R. (2022). Sensibilização alérgica in vivo como estratégia experimental de otimização do protocolo convencional in vitro de diferenciação eosinofílica: impacto na produtividade [Trabalho de Conclusão de Curso, Universidade Federal do Rio de Janeiro]. Repositório Institucional Pantheon. |
| Aparece nas coleções: | Ciências Biológicas - Microbiologia e Imunologia |
Arquivos associados a este item:
| Arquivo | Descrição | Tamanho | Formato | |
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