Pantheon Repositório Institucional da UFRJ
Coleta, preserva e divulga a produção acadêmica digital em todas as áreas do conhecimento.
São os ativos do repositório, além de teses e dissertações da UFRJ, artigos científicos, livros eletrônicos, capítulos de livros e trabalhos apresentados em eventos por professores, pesquisadores, funcionários administrativos e alunos de mestrado e doutorado.
Use este identificador para citar ou linkar para este item:
http://hdl.handle.net/11422/20257| Tipo: | Dissertação |
| Título: | Concentração de partículas pseudovirais de Zika vírus por ultrafiltração |
| Autor(es)/Inventor(es): | Zamprognio, Maycou Soares |
| Orientador: | Castilho, Leda dos Reis |
| Coorientador: | Ferraz, Helen Conceição |
| Resumo: | Este trabalho investigou a separação de partículas pseudovirais (VLPs) de Zika vírus contidas em sobrenadante de cultivo celular através da operação de ultrafiltração. As VLPs foram produzidas por células da linhagem HEK293 - 3F6 (Human Embryonic Kidney cells) transfectadas com o vetor plasmidial comercial PCI-NEO® (Promega) contendo as sequências genéticas referentes às proteínas estruturais de pré-membrana (pr-M) e envelope (E) do vírus Zika. As técnicas utilizadas neste estudo compreenderam análises qualitativas, a partir dos métodos de Immunoblot, SDS-PAGE e Western blot; quantificação de proteínas, através de testes de densitometria e Bradford; bem como análise da distribuição de tamanho de partículas, ao utilizar a metodologia de HPLC/SEC-UV. Operações em bateladas sequenciais de 14 mL em dispositivo Vivaspin® contendo membranas de poliétersulfona (PES) com massa molecular de corte de 300 kDa e 1000 kDa foram investigadas e a membrana de menor cut-off apresentou maior eficiência de separação. Desta forma, os estudos posteriores em célula de ultrafiltração agitada Amicon® avaliou o emprego das membranas de PES de 500 kDa e celulose regenerada (RC) de 100 kDa, no qual a membrana de PES de 500 kDa apresentou qualitativamente melhor desempenho na retenção e concentração das VLPs. |
| Resumo: | This work assessed the separation of virus-like particles (VLPs) through ultrafiltration operation. The VLPs were constitutively expressed by HEK293 - 3F6 cell line (Human Embryonic Kidney cells) transfected with commercial plasmidial vector PCINEO® (Promega) encoding the genetic sequences of premembrane (pr-M) and envelope (E) structural proteins of Zika virus. The assessment techniques were based on qualitative analysis, such as the Immunoblot test, SDS-PAGE and Western blot; protein quantification, through densitometry and Bradford assays; and the particle diameter distribution analysis by using HPLC/SEC-UV. Sequential batches of 14 mL in Vivaspin® devices embedded with polyethersulfone of 300 kDa and 1000 kDa membranes were analyzed and better performance was achieved with the lowest cut-off. Therefore, batch operations in agitated Amicon® cell filled with 200 mL of clarified supernant were conducted with 500 kDa polyethersulfone and 100 kDa regenerated cellulose membranes. Despite both membranes showing concentration capacity to Zika virus-like particles, the PES membrane displayed higher efficiency. |
| Palavras-chave: | Flavivírus Zika Partícula pseudoviral Concentração |
| Assunto CNPq: | CNPQ::ENGENHARIAS::ENGENHARIA QUIMICA::PROCESSOS INDUSTRIAIS DE ENGENHARIA QUIMICA::PROCESSOS BIOQUIMICOS |
| Programa: | Programa de Pós-Graduação em Engenharia Química |
| Unidade produtora: | Instituto Alberto Luiz Coimbra de Pós-Graduação e Pesquisa de Engenharia |
| Editora: | Universidade Federal do Rio de Janeiro |
| Data de publicação: | Fev-2019 |
| País de publicação: | Brasil |
| Idioma da publicação: | por |
| Tipo de acesso: | Acesso Aberto |
| Aparece nas coleções: | Engenharia Química |
Arquivos associados a este item:
| Arquivo | Descrição | Tamanho | Formato | |
|---|---|---|---|---|
| 899126.pdf | 1.65 MB | Adobe PDF | Visualizar/Abrir |
Os itens no repositório estão protegidos por copyright, com todos os direitos reservados, salvo quando é indicado o contrário.