Pantheon Repositório Institucional da UFRJ
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http://hdl.handle.net/11422/21181| Tipo: | Trabalho de conclusão de graduação |
| Título: | Produção de soroalbumina por rota fermentativa utilizando Pichia pastoris |
| Autor(es)/Inventor(es): | Kalaoun Filho, Samir |
| Orientador: | Nascimento, Rodrigo Pires do |
| Coorientador: | Barreto Júnior, Amaro Gomes |
| Resumo: | A produção de macromoléculas biológicas, tais como as proteínas, é um dos principais ramos de estudo da indústria biotecnológica. A soroalbumina humana (HSA) é a proteína mais abundante do plasma sanguíneo, apresentando funções vitais de manutenção da pressão osmótica sanguínea, manutenção do pH e transporte de moléculas. O principal método utilizado para obter a HSA hoje, é o fracionamento por etanol a frio a partir de amostras de sangue obtidos via doação, sendo um processo limitado pela quantidade de sangue doado. A fim de evitar o uso de sangue como fonte de HSA e mitigar alguns dos riscos associados a este procedimento, métodos alternativos para produzir a soroalbumina humana estão sendo explorados. A HSA recombinante (rHSA) surge como uma alternativa à HSA plasmática. A rHSA pode ser desenvolvida e expressa como uma forma alternativa de soroalbumina em sistemas biológicos (bactérias, leveduras, plantas e animais) de expressão. Assim sendo, o objetivo deste trabalho foi estudar o uso de Pichia pastoris como um sistema de expressão biológica para a produção de soroalbumina de rato recombinante (rMSA), proteína com alto grau de semelhança à HSA, via promotor constitutivo PGAP. Esta espécie de levedura é comumente utilizada para expressar proteínas em função do seu rápido crescimento, menor sensibilidade às alterações nutricionais e ambientais, e capacidade de atingir altas densidades celulares durante o cultivo. A metodologia consistiu na utilização de frascos agitados e experimentos em biorreator para análise do crescimento celular, produção de proteínas, concentração de glicose no meio e análise do gás de exaustão. Após os experimentos, a qualificação dos bioprodutos foi realizada por eletroforese em gel, e para mensurar a acurácia dos resultados, um balanço de massa de carbono foi proposto. Os experimentos para a produção de rMSA foram considerados bem-sucedidos, mesmo produzindo pequena quantidade de proteínas quando comparado à literatura. Apesar de se almejar valores de produção de rMSA entre 3 g/L e 10 g/L, os experimentos realizados alcançaram produções de aproximadamente 0,3-0,4 g/L. Já em relação ao crescimento celular, pode-se observar que as leveduras atingiram valores de concentração de até 8 g/L, concentrações estas consideradas baixas de acordo com a literatura. Novos estudos da produção de rHSA e análogos deverão ser conduzidos para otimizar a produção por rota fermentativa e, em seguida, sistemas de separação e purificação da proteína em questão devem ser estudados. Adicionalmente, ainda há alguns desafios e debates em torno da utilização de soroalbumina, que discutem o papel e a eficácia da proteína em tratamentos médicos, revisando os critérios utilizados para a regulação de seu uso. |
| Palavras-chave: | Albumina Proteína Fermentação Biotecnologia Microbiologia industrial |
| Assunto CNPq: | CNPQ::ENGENHARIAS::ENGENHARIA QUIMICA::OPERACOES INDUSTRIAIS E EQUIPAMENTOS PARA ENGENHARIA QUIMICA::REATORES QUIMICOS CNPQ::CIENCIAS BIOLOGICAS::BIOQUIMICA CNPQ::CIENCIAS BIOLOGICAS::MICROBIOLOGIA::MICROBIOLOGIA INDUSTRIAL E DE FERMENTACAO |
| Unidade produtora: | Escola de Química |
| Editora: | Universidade Federal do Rio de Janeiro |
| Data de publicação: | Ago-2017 |
| País de publicação: | Brasil |
| Idioma da publicação: | por |
| Tipo de acesso: | Acesso Aberto |
| Aparece nas coleções: | Engenharia Química |
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