Pantheon Repositório Institucional da UFRJ
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http://hdl.handle.net/11422/21854| Tipo: | Trabalho de conclusão de graduação |
| Título: | Avaliação do composto RPJ-12 como modulador da agregação da proteína alfa-sinucleína |
| Autor(es)/Inventor(es): | Bastos, Anderson Leite |
| Orientador: | Braga, Carolina Alvares da Cunha de Azeredo |
| Coorientador: | Pacheco, Marcos Eduardo Braga |
| Resumo: | A doença de Parkinson (DP) é a segunda desordem neurodegenerativa mais comum nos Estados Unidos, afetando pessoas acima dos 60 anos de idade. Tem como principais características patológicas a morte dos neurônios dopaminérgicos na substância nigra, assim como, a presença de inclusões protéicas denominadas corpos de Lewy, tendo como sua principal constituinte a proteína alfa sinucleína (aS). A busca por novas terapias é de vital relevância, tendo em vista que as atuais alternativas terapêuticas visam à redução dos sintomas associados à DP, não interferindo de maneira significativa em sua progressão. Estudos recentes in vitro têm elucidado os mecanismos de agregação da proteína aS e nos permitem avaliar moléculas que sejam eficazes na modulação da agregação, agindo como inibidores ou neuroprotetores da toxicidade destas espécies, assim, impedindo a morte dos neurônios dopaminérgicos. Alguns compostos orgânicos estão sendo identificados com atividade anti-prion, por apresentarem baixa toxicidade e elevada eficácia, tendo em vista que já foi demonstrado que a DP apresenta mecanismo prion-like (JAN, A. et al., 2021), ou seja, que a proteína aS agregada pode ser transmitida de célula a célula, ampliando o processo degenerativo.O presente estudo tem como objetivo avaliar o composto RPJ-12, generosamente cedido pelo grupo coordenado pela Profª Drª Yraima Cordeiro (UFRJ), e desenvolvido baseado em substâncias identificadas como eficazes na inibição da agregação da proteína prion, que está envolvida nas encefalopatias espongiformes transmissíveis, assim como a estrutura quinolina, presente no composto que já foi descrito na literatura suas atividades antibacteriana, antifúngica, anticonvulsivante, anti-inflamatória (Akranth Marella et al., 2013), neuroprotetora e antioxidante (FERNÁNDEZ-BACHILLER et al., 2010). Para isso, foi realizada a expressão e a purificação da proteína aS selvagem (WT). A proteína aS liofilizada foi diluída em tampão fosfato salino (PBS) até concentração final no experimento de 70 μM e incubada em condições de agregação (37ºC, agitação constante e pH 7,4) (Braga et al., 2011) onde acompanhamos a formação de agregados através da ligação a tioflavina T (corante específico para identificar e quantificar agregados amilóides) e da sonda ANS (corante amplamente utilizado para estudar os processos de enovelamento de proteínas, ao se ligar às superfícies hidrofóbicas expostas das proteínas) e microscopia eletrônica de varredura no modo STEM. Os resultados demonstraram através da cinética de agregação da aS WT, avaliada pela sonda Tioflavina-T, que o composto RPJ-12 inibiu em aproximadamente 80% a formação final de espécies amilóides. Na cinética de agregação da aS WT, avaliada pela sonda ANS, a proteína na presença e na ausência do composto RPJ-12 não apresentou diferenças significativas. No MEV, foi possível observar, através da morfologia dos agregados, que a proteína na ausência do composto apresentou estruturas mais evidentes após 24 horas de agregação, e na presença do composto houve um aumento na velocidade de agregação, sendo possível observar estruturas mais amorfas e desorganizadas. Com base nos resultados obtidos, podemos sugerir um papel modulador da agregação da proteína alfa-sinucleína pelo composto RPJ-12, porém elucidar os mecanismos desta modulação se faz necessário. |
| Palavras-chave: | Doença de Parkinson Amiloidoses Alfa sinucleína RPJ-12 |
| Assunto CNPq: | CNPQ::CIENCIAS BIOLOGICAS::GENETICA::GENETICA HUMANA E MEDICA |
| Unidade produtora: | Campus Duque de Caxias Professor Geraldo Cidade |
| Editora: | Universidade Federal do Rio de Janeiro |
| Data de publicação: | 13-Jul-2023 |
| País de publicação: | Brasil |
| Idioma da publicação: | por |
| Tipo de acesso: | Acesso Aberto |
| Aparece nas coleções: | Ciências Biológicas - Biotecnologia |
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